انتقال سازه ژنی ω-gus-sar به گیاه توتون و بررسی گیاهان تراریخت

جذابیت سیستم¬های گیاهی برای بیان پروتئین¬های نوترکیب به دلیل مزایای همچون ایمنی بالا، هزینه پایین، تغییرات پس از ترجمه و حجم بالای تولید است. بیان بالای ترنسژن در گیاه، مستلزم آماده کردن سازه ژنی مناسب حاوی پیشبرنده مناسب، عوامل افزایش دهنده بیان، عوامل ممانعت کننده از خاموشی ژن و... قبل از انتقال به گیاه است. در این تحقیق از سازه اختصاصی بذر، حاوی توالی افزاینده¬ بیان (ω) در بالا دست ژن gus و نیز توالی جلوگیری کننده از خاموشی ترنسژن (sar)در پایین دست ژن gus تحت کنترل پیشبرنده napin (پیشبرنده اختصاصی بذر) که قبلا تهیه شده بود، استفاده گردید. سازه ω-gus-sar ابتدابه اگروباکتریوم سویه lba4404 و سپس به ریزنمونه¬های برگی توتون انتقال داده شد. باززائی و گزینش جوانه¬ها درمحیط گزینشگر (شاملms، mg/l 1/0 naa، mg/l3 bap ، mg/l 25 کانامایسین، mg/l 200 سفاتوکسیم) انجام شد سپس گیاهان به محیط طویل شدن ساقه، ریشه¬زایی و نهایتا به پرلیت و خاک منتقل شدند. ارزیابی گیاهان تراریخت با استفاده از واکنش pcr و rt-pcr،sds¬-page وآزمون هیستوشیمیایی gusانجام شد. واکنش pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن های nptii و gus نشاندهنده انتقال این ژن ها به گیاهچه های باززایی شده بود. واکنش rt-pcr نیز انجام رونویسی و تولید mrna ژنgus را در بذر اثبات نمود.آزمون sds-page باند kd68پروتئین gus را نشان داد و نتایج حاصل از آزمون هیستوشیمیایی نشاندهنده بیان ژن gus در بذور تراریخت توتون بود.